Инфекция вэб

Большинство людей инфицируются ЭБВ на определенном этапе жизни. Чаще всего вирус распространяется через жидкости — в первую очередь слюну. Он может вызвать инфекционный мононуклеоз, синдром хронической усталости, онкологические лимфопролиферативные процессы и другие болезни.

Симптомы вируса Эпштейна-Барр

Вирус герпеса человека 4 проявляется такими симптомами:

• повышенная утомляемость;
• повышенная температура;
• воспаленное горло;
• увеличенные шейные лимфоузлы;
• увеличенная селезенка;
• увеличенная печень;
• снижение аппетита;
• высыпания на коже.

Признаки болезни обычно появляются и достигают пика через 4–6 недель после инфицирования.

У инфицированных детей вирус Эпштейна-Барр либо не вызывает симптомов, либо провоцирует симптомы, которые не отличаются от признаков быстротекущих и неострых детских болезней (простуды, ОРЗ). В подростковом возрасте и у взрослых людей самочувствие улучшается через 2–4 недели после проявления симптомов. Некоторые больные чувствуют слабость в течение нескольких месяцев.

В редких случаях вирус Эпштейна-Барр дает довольно тяжелые осложнения. Нужно немедленно обратиться к врачу при следующих симптомах:

• внезапная острая боль в левой части живота, сигнализирующая о проблемах с селезенкой;
• малое количество мочи при мочеиспускании, что говорит об обезвоживании организма;
• затрудненное дыхание и глотание.

После завершения острого инфекционного процесса вирус становится неактивным — наступает латентная стадия его существования. Иногда он может реактивировать. Люди с сильным иммунитетом легко переносят период возобновления действия вируса. При ослабленном иммунитете во время рецидива могут развиться вышеперечисленные симптомы.

Передача вируса Эпштейна-Барр

Как уже было сказано, ЭБВ распространяется через телесные жидкости: кроме слюны, это могут быть кровь и сперма. Нередко вирус передается во время полового контакта, переливания крови и трансплантации органов.

Заражение может произойти, если больной и здоровый человек пользуются одними и теми же предметами (зубной щеткой, стаканом для питья). Вирус живет на предметах, пока они остаются влажными.

Диагностика вируса Эпштейна-Барр в Израиле

Выявление вируса — довольно сложная задача, поскольку вызванные им симптомы можно спутать с признаками других заболеваний, например, ангины или простуды. Основной метод определения наличия вируса и периода инфекционного процесса — это анализ крови на антитела к антигенам вируса:

1) антитела класса иммуноглобулинов М IgM к капсидному антигену (появляются в острый период и при реактивации вируса, сохраняются 2–3 месяца);

2) антитела класса иммуноглобулинов G gG к раннему антигену (достигают высокого титра на 3–4 неделе острой стадии ЭБВ-инфекции, пропадают через 2–6 месяцев);

3) антитела класса иммуноглобулинов G IgG к ядерному антигену вируса (обнаруживаются через 1–6 месяцев после инфицирования).

У девяти из десяти взрослых находят названные антитела, что свидетельствует о перенесенной инфекции или текущем инфекционном процессе. Таким образом, около 90 % людей заражены этим вирусом.

Профилактика и лечение вируса Эпштейна-Барр в Израиле

Против вируса герпеса человека 4 не существует вакцин. Защитить себя можно, соблюдая правила гигиены: не пить и не есть из чужой посуды, не использовать чужие средства гигиены, избегать поцелуев и половых контактов с людьми, если нет уверенности в их идеальном состоянии здоровья.

Также не существует специального лечения вируса Эпштейна-Барр. Врачи прибегают к назначению симптоматического лечения, облегчающего общее состояние, например, полосканию горла теплой соленой водой, приему болеутоляющих средств (ибупрофена и др.) для снижения температуры и снятия мышечных болей. Терапия подразумевает соблюдение особого режима, в частности, обильное употребление жидкости, полноценный отдых, временный отказ от занятий спортом.

K^us!ребёнка

¡нфекцп в д1тей / Infections in Children

УДК 616.988:578.825]-053.2

ХОДАКЛ.А., БРАИЛКО В.И. Харьковская медицинская академия последипломного образования

СИНТРОПИЯ ПРИ ВЭБ-ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ

Резюме. Клинические проявления болезни, вызываемой вирусом Эпштейна — Барр (ВЭБ), многообразны и включают в себя как инфекционный мононуклеоз, так и поражение печени, нервной системы и других органов. Поражение нервной системы (менингоэнцефалит), обусловленное ВЭБ, может иметь изолированное течение или протекать одновременно с инфекционным мононуклеозом или гепатитом (син-тропия). В работе представлена острая форма ВЭБ-инфекции у ребенка 16 лет, в структуре которой диагностирован гепатит и менингоэнцефалит.

Ключевые слова: ВЭБ-инфекция, дети, гепатит, менингоэнцефалит.

Введение

Среди семейства герпесвирусов за значительную часть патологии несет ответственность вирус Эпштейна — Барр (ВЭБ), у-герпесвирус или вирус герпеса человека 4-го типа .

Возможность после первичного инфицирования пожизненно персистировать в организме объясняет оппортунистический характер возбудителя .

На протяжении длительного времени ВЭБ ассоциировался исключительно с инфекционным мононуклеозом (ИМ). В последние годы благодаря высокочувствительным методам лабораторной диагностики (иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция (ПЦР)) представления о клинических проявлениях ВЭБ-инфекции значительно расширились и включают в себя поражение печени, нервной системы и других органов . Определена роль ВЭБ как триггерного фактора развития атеросклероза, болезни Альцгей-мера, рассеянного склероза, онкогематологических заболеваний .

Выделяют латентную, острую и хроническую формы ВЭБ-инфекции, каждую из которых можно подтвердить в лабораторных условиях. В последние годы все больше указывают на преобладание хронических активных форм ВЭБ-инфекции .

При ИМ поражается лимфоидная ретикулоэн-дотелиальная система, поэтому у всех больных в патологический процесс вовлекается печень . Изменения наблюдаются в виде гепатита или паренхиматозной реакции печени. Может отмечаться изолированный ВЭБ-гепатит, который в структуре герпесвирусных гепатитов занимает первое место. Характерно повышение аминотранс-

фераз у 50—80 % больных при нормальных показателях билирубина (желтуха бывает редко — 5 % случаев). Пролиферация клеток Купфера с умеренным развитием холестаза, сохранение структуры печени — изменения, характерные для острого гепатита (специфический вирусный гепатит). Может развиваться холецистит, холангит, эндотелиит . У 20 % больных увеличение печени может сохраняться длительно, не связано с какой-либо другой гастроэнтерологической патологией. Отмечается медленный регресс биохимических показателей печени. Такие больные требуют длительного наблюдения в катамнезе.

В связи с нейротропностью вируса может отмечаться изолированное поражение нервной системы (менингоэнцефалит, арахноидит, полирадикуло-нейропатия) или синтропия, когда в патологический процесс, обусловленный одним возбудителем, включается поражение двух и более органов .

Материалы и методы

В течение последних 10 лет в Областной детской инфекционной клинической больнице г. Харькова ВЭБ-энцефалит был диагностирован у 47 больных в возрасте от 3 до 17 лет. У 32 детей диагностирован энцефалит, у 15 больных заболевание протекало с

Адрес для переписки с авторами: Браилко Виктория Игоревна E-mail: BRAILKO-VI@rambler.ru

© Ходак Л.А., Браилко В.И., 2015 © «Здоровье ребенка», 2015 © Заславский А.Ю., 2015

вовлечением в патологический процесс оболочек головного мозга — менингоэнцефалит. Клинический диагноз основывался на общеинфекционной, общемозговой (головная боль, рвота, судороги, нарушение сознания), очаговой неврологической симптоматике, данных МРТ головного мозга. У всех больных этиология заболевания была установлена на основании обнаружения антител острой и подострой фазы к ВЭБ методом ИФА в сыворотке крови. У 39 больных обнаружена ДНК ВЭБ в ликво-ре методом ПЦР.

У 15 (31,9 %) детей отмечалась синтропия. У 12 детей на фоне ИМ с поражением печени развился менингоэнцефалит. У 3 детей клиники ИМ не отмечалось, был выражен гепатит с преобладанием синдрома цитолиза в сочетании с менингоэнцефа-литом.

Острая форма заболевания, диагностированная у 4 детей, основывалась на выявлении ранних антител к антигенам (EBV VCA IgM, EBV EA IgG) без анти-EBV Na IgG. Для хронической активной ВЭБ-инфекции (11 детей) наряду с маркерами острой фазы обязательным условием было наличие маркеров поздней фазы (EBV Na IgG).

У больных с хронической активной ВЭБ-инфекцией в анамнезе отмечались частые острые респираторные инфекции, синдром лимфаденопа-тии, судорожный синдром; один ребенок наблюдался у невролога по поводу эпилепсии.

В работе представлено клиническое наблюдение больного с острой формой ВЭБ-инфекции, проявляющейся сочетанным поражением лимфоидно-ретикулярной системы (гепатит) и нервной системы (менингоэнцефалит).

Результаты и обсуждение

Больная П. (номер истории болезни 8561), 16 лет, поступила в Областную детскую инфекционную больницу г. Харькова на 10-е сутки заболевания с жалобами на повышение температуры тела до 38,0 оС, головную боль, однократную рвоту, боль в горле при глотании. В течение 10 дней лечилась самостоятельно, получала симптоматическую терапию, эффекта не отмечалось. Состояние при поступлении расценивалось как средней тяжести за счет умеренных симптомов интоксикации, отмечалась гиперемия в зеве, сомнительные менингеальные симптомы. На 2-й день пребывания в стационаре состояние ребенка резко ухудшилось — развились генерализованные клонико-тонические судороги, которые в динамике повторились, появились зрительные галлюцинации, общее возбуждение. В неврологическом статусе: сознание — сопор, глазные щели S < D, сглаженность носогубной складки слева. Ребенок был переведен на искусственную вентиляцию легких, которая проводилась в течение 3 дней. В клиническом анализе крови: лейкоцитоз 20,6 х 109/л, лимфомоноцитоз (лимфоциты — 64 %, моноциты — 12 %). Вироциты в клиническом анализе крови отсутствовали. При исследовании лик-

вора — серозный менингит (цитоз — 225 х 106/л (лимфоциты — 80 %, нейтрофилы — 20 %); белок — 0,48 г/л; глюкоза — 2,8 ммоль/л; хлориды — 128 ммоль/л). По данным МРТ головного мозга: слабо выраженный диффузный отек кортикальных отделов. Оболочки уплотнены. Катаральный отек слизистых придаточных пазух носа. Заключение: менингоэнцефалит. Методом ИФА в крови были выявлены маркеры острой фазы к EBV (VCA IgM — 1,88; EA IgG — 2,7). Методом ПЦР в спинномозговой жидкости выявлена ДНК EBV. Поражение нервной системы сочеталось с вовлечением в патологический процесс печени. По данным УЗИ органов брюшной полости: печень увеличена до 4 см ниже края реберной дуги. Эхогенность повышена до 12-й градации (норма 67 см). Отмечался синдром цитолиза: АЛТ — 142 Ед/л (норма до 27 Ед/л), АСТ — 63,2 Ед/л (норма до 29 Ед/л), билирубин в норме. Маркеры на вирусные гепатиты отрицательные. Проведена специфическая противовирусная терапия ацикловиром по 500 мг 3 раза в сутки в/в капельно на протяжении 7 дней с последующим переходом на прием внутрь до 3 недель. На фоне терапии состояние ребенка улучшилось: температура тела стойко нормализовалась, отмечались санация ликвора, регресс неврологической симптоматики. К выписке сохранялось незначительное повышение трансаминаз (АЛТ — 60 Ед/л; АСТ — 32 Ед/л), что требовало диспансерного наблюдения у гастроэнтеролога.

Отсутствие маркеров поздней фазы (EBV Na IgG) позволило диагностировать острую форму ВЭБ-инфекции, менингоэнцефалит, гепатит, тяжелое течение.

Выводы

1. ВЭБ-инфекция может протекать как в острой, так и в хронической форме, среди которых преобладает хроническая активная.

2. Для острой первичной ВЭБ-инфекции характерно выявление в сыворотке крови маркеров ранней фазы — EBV VCA IgM, EBV EA IgG при отсутствии маркеров поздней фазы — EBV Na IgG. Для активной хронической ВЭБ-инфекции обязательным условием с выявлением маркеров острой фазы является наличие EBV Na IgG.

3. Поражение нервной системы (менингоэнцефалит) при ВЭБ-инфекции может иметь изолированное течение или протекать одновременно с инфекционным мононуклеозом и/или гепатитом (синтропия).

4. При ВЭБ-гепатите преобладает синдром цитолиза; превалируют безжелтушные формы заболевания с длительно сохраняющимися нарушениями ферментативной функции печени, что требует диспансерного наблюдения за данной группой больных.

Список литературы

1. Дуда О.К. Гостра EBV-шфекцы у дорослих / О.К. Дуда, Р.О. Колесник //Актуальная инфектология. — 2014. — № 4. — С. 15-21.

Здоровье ребенка, ISSN 2224-0551

№ 4 (64) • 2015

3. Маврутенков В.В. Гострi ураження нервовог системи, що обумовлет герпесвiрусною шфекщею Епштейна-Барр /

B.В. Маврутенков // Украгнський вкник психоневрологи. — 2008. — Т. 13, вип. 2/431. — С. 21-25.

5. Ржевська О. О. Особливостi переб.1гу ВЕБ-метнгоенцефал^в у дтей / О.О. Ржевська, ЛА. Ходак // 1н-фекцШт хвороби. — 2009. — № 1. — С. 30-34.

C. 3-13.

9. Юлиш Е.И. Атеросклероз и герпесвирусные инфекции. История одной гипотезы / Е.И. Юлиш // Здоровье ребенка. — 2012. — № 5. — С. 103-108.

Получено 24.12.14 ■

Ходак Л.А., Бралко В.1.

Харквська медична академя пслядипломноI освпи СИНТРОШЯ ПРИ ВЕБ-ШФЕКЦМ В Д|ТЕЙ

Резюме. Ктшчш прояви хвороби, спричинено! вiрусом Епштейна — Барр (ВЕБ), рiзноманiтнi та включають у себе як шфекцшний мононуклеоз, так i ураження печш-ки, нервово! системи й шших оргашв. Ураження нервово! системи (мешнгоенцефалгт), обумовлене ВЕБ, може мати iзольований переб^ або протжати одночасно з шфекцш-ним мононуклеозом або гепатитом (синтроп1я). У робол представлено гостру форму ВЕБ-шфекци в дитини 16 ро-шв, у структурi яко! дiагностовано гепатит i мешнгоенцефалгт.

Ключовi слова: ВЕБ-шфек^, дии, гепатит, мешнгоенцефалгт.

KhodakL.A., Brailko V.I.

Kharkiv Medical Academy of Postgraduate Education, Kharkiv, Ukraine

SYNTROPY IN CHILDREN WITH EBV INFECTION

Вирус Эпштейна-Барр (далее — ВЭБ), официально — Human gammaherpesvirus 4, — один из 8 известных науке типов герпесвирусов и, с высокой вероятностью, самый распространённый вирус человека.

Например, в США у более 90 % взрослых и 50 % детей есть признаки инфицирования ВЭБ. Американские врачи считают, что оставшиеся 10 % взрослых просто не обследованы. В России медики определяют уровень инфицированности взрослого населения 97 %.

Медики предполагают, что всё взрослое население земли заражено вирусом, потому что передаётся он чрезвычайно просто — со слюной (при поцелуе, пользовании общей посудой, чихании, когда вы делитесь пищей, которую уже откусили) и генитальным секретом, а сохраняется в организме до конца жизни. Выявлены случаи передачи вируса с кровью при её переливании и бытовом попадании «кровь в кровь».

Особый случай — инфицирование при пересадке органов. В связи с распространением трансплантаций подобные инфекции встречаются всё чаще и вызывают нетипичные осложнения и заболевания после трансплантации.

У большинства людей ВЭБ «хранится» в клетках в латентной форме и активируется при благоприятных ему условиях — критическом снижении иммунитета, стрессе, другом заболевании и т. д. Но часто реактивация происходит без видимых причин — учёным только предстоит выявить её причины.

Опасность вируса в том, что в активной форме он становится причиной инфекционного мононуклеоза, связан с возникновением лимфомы Беркитта, гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза, лимфомы Ходжкина, рака желудка, рака носоглотки, лимфомы центральной нервной системы, синдрома Алисы в стране чудес (нарушение восприятия), острой мозжечковой атаксии (нарушение походки, движений).

По данным, полученным врачами Cincinnati Children’s Hospital Medical Center — Медицинского центра Цинцинатти (США), ВЭБ может послужить причиной развития рассеянного склероза, целиакии, системной красной волчанки, диабета I типа, ювенильного идиопатического артрита, ревматоидного артрита. Даже хроническая усталость человека связана напрямую с ним.

Показания к проведению анализа

У большинства людей заражение вирусом происходит бессимптомно или с незначительными проявлениями, которые быстро проходят. Организм вырабатывает к вирусу стойкий иммунитет, и человек живёт с «законсервированным» в клетке вирусом всю жизнь.

Но анализ на ВЭБ часто необходим, чтобы отличить одну инфекцию от другой и назначить эффективное лечение. Вирус «маскируется» под ОРВИ, гепатит, ангину с устойчиво высокой температурой (до 10 % всех случаев ангины), при которой увеличиваются лимфоузлы. В большинстве случаев ВЭБ вызывает инфекционный мононуклеоз. Особенно реактивна инфекция у подростков и в возрасте до 5 лет, причём у мальчиков она проходит в острой форме в 2 раза чаще, чем у девочек.

Симптомы заражения при постепенном развитии:

• ухудшается самочувствие;

• температура повышается до субфебрильных показателей — 37,1—38,0 °C;

• появляются катаральные симптомы — отёчность носа и носоглотки, заложенность, слизистая носоглотки становится красной, нёбные миндалины тоже краснеют;

• лимфатические узлы — подчелюстные, на затылке, шее) отёчные, на ранней стадии — неболезненные или со слабыми болезненными ощущениями.

Симптомы заражения при остром начале болезни:

• резкое повышение температуры до 38—39 °C;

• лихорадка с ознобом и повышенным потоотделением;

• головная боль;

• боль в скелетных мышцах;

• боль в горле при сглатывании;

• увеличение лимфоузлов.

У заражённых увеличиваются селезёнка, печень, появляется сыпь на 3—5 день. Иногда увеличенная селезёнка разрывается.

Однако единой, характерной симптоматики не существует — признаки заражения учёные объединили в «мононуклеозоподобный синдром». Потому при любых проявлениях необходимо сдать анализы на обнаружение вируса.

Анализы на вирус Эпштейна-Барр

Направление на анализы даёт терапевт, инфекционист, врач общей практики, педиатр. Исследование проводится на различном биоматериале — сыворотке крови, мазках и соскобах слизистой ротоглотки, урогенитального тракта, слюне, цереброспинальной жидкости, лейкоцитах периферической крови.

Для выявления инфекции чаще прочего проводят серологические тесты. Однако часто требуется комплексное тестирование, потому что серологические тесты в случаях переливания крови, иммунодефицита и некоторых других противоречат друг другу. Точную клиническую картину в сложных случаях даёт ПЦР-диагностика на ДНК ВЭБ.

Вирус определяется только лабораторными способами, причём в большинстве случаев требуется несколько тестов, чтобы исключить прочие инфекционные заболевания.

Общий анализ крови на вирус Эпштейна-Барр

Общий анализ крови не позволяет установить точно ВЭБ. Определение лейкоцитоза, лимфоцитоза, атипичных мононуклеаров свидетельствует лишь о наличии инфекционного заболевания, но не даёт его идентифицировать. Однако, если определено отсутствие лейкоцитоза, то можно с уверенностью говорить, что инфекционного мононуклеоза нет. Другими признаками против диагноза ВЭБ являются анемия и тромбоцитопения.

Если общий анализ крови вызывает подозрения на ВЭБ, проводят дополнительные исследования.

Биохимический анализ

В биохимическом анализе при инфицировании ВЭБ наблюдают:

• повышение АЛТ, или аланинаминотрансферазы, — фермента печени, почек, поджелудочной железы;

• повышение АСТ, или аспартатаминотрансферазы, — фермент преимущественно клеток сердца и печени;

• повышение ЩФ, или щелочной фосфатазы;

• повышение билирубина — главного компонента желчи;

• понижение нейтрофилов;

• понижение тромбоцитов.

Изменение биохимических показателей печени характерны для 90 % инфицированных.

Гетерофильный тест

Гетерофильный тест, или реакция Пауля и Буннеля, основана на определении в сыворотке крови противобараньих агглютининов. Тест выявляет гетерофильные антитела, и при титре 1:224 ставится диагноз мононуклеоза.

Гетерофильный тест даёт положительный результат у 60 % инфицированных спустя 2 недели после обнаружения симптомов и у 90 % инфицированных спустя месяц после первых клинических проявлений. Потому точность его невелика, а на начальной стадии он не помогает определить ВЭБ, т. к. титр гетерофильных тел повышается и в ответе на другую вирусную инфекцию.

Чувствительность теста у детей составляет менее 70 %, а способность идентифицировать вирус — менее 20 %. С возрастом пациентов польза теста и его чувствительность/специфичность увеличиваются.

Серологические исследования

Жизнедеятельность ВЭБ в организме (завершённый и незавершённый литический (активный) цикл, латентная фаза) происходит на фоне выработки специфических антител к белкам вируса. Исследование антител позволяет определить и дифференцировать острую форму, перенесённую инфекцию и хроническую инфекцию вирусом.

На ранних стадиях (3—4 недели после заражения и до 3—4 месяцев после) определяются иммуноглобулины IgG к ранним антигенам EA — их считают маркерами острой стадии инфекции, хотя нередко они выявляются и при хроническом инфицировании.

Иммуноглобулины IgG к VCA — капсидному белку — определяются в момент проявления болезни и считаются маркерами острого стадии болезни. Они пропадают через несколько недель. Однако есть люди, у которых VCA-IgM не определяются, потому всегда необходимо комплексное тестирование.

Антиген EBNA IgG не определяется на начальной стадии заболевания, потому свидетельствует о перенесённой или хронической инфекции. Последняя отличается высоким титром антигена.

ПЦР диагностика

ПЦР-диагностика относится к высокочувствительным тестам при инфицировании ВЭБ. Для её проведения используют лейкоцитарную фракцию крови.

Если ДНК вируса выявляется в плазме крови, то ставится диагноз инфекции в активной форме. ДНК вируса выявляется даже в период латентной фазы у людей, признанных клинически здоровыми — 0,1–1 копий/106 клеток. Хроническая и острая стадия выявляются количественной ПЦР.

Если вирусная нагрузка высока, она может ассоциироваться с большим риском тяжёлых осложнений и требует антивирусной терапии. ДНК в ликворе говорит, что вирус активно размножается в нервной системе — эту ПЦР-диагностику ВЭБ проводят, когда выявляют этиологию поражения нервной системы.

ПЦР проводят при выявлении опухолей, тяжёлых осложнений. В этом случае ДНК вируса обнаруживают в лимфоузлах, слизистой кишечника, биоптатах печени. ПЦР необходимо и при заболеваниях, возникших после трансплантации органов.

Однако отрицательный результат ПЦР-диагностики не исключает репликации вируса в лимфоузлах, костном мозге, дерме, желудке и кишечнике. Потому ПЦР рекомендовано использовать всегда в сочетании с серологическими методами диагностики ВЭБ.

Профилактика и рекомендации

Не заразиться ВЭБ в современном мире почти невозможно. Для этого пришлось бы исключить всякие контакты с людьми, причём с рождения, никого не целовать, не вступать в сексуальные отношения.

Как ни парадоксально, но лучше, если заражение случится в детском возрасте, потому что дети легче переносят инфекцию (как, к примеру, и ветряную оспу, вызванную также герпесвирусом, только 3 типа), у них вырабатывается стойкий иммунитет.

Инфицирование в детстве характерно для стран с низким уровнем жизни, в подростковом и взрослом — с высоким уровнем жизни. Играет роль санитарная культура, общая культура людей. Но она же приводит и к более серьёзным последствиям инфекции, потому что иммунный ответ человека, живущего в благоприятных условиях, намного слабее.

Только иммунитет способен защитить нас от вируса Эпштейна-Барр. Попав в организм, он сохраняется в нас до конца жизни в латентной фазе. Снижение иммунитета, вызванное заболеваниями, образом жизни, ведёт к реактивации ВЭБ и непредсказуемым последствиям — учёным пока удалось только выявить ассоциированные с вирусом заболевания (о чём мы говорили вначале), но не установить закономерность их развития.

Инфекции против ВЭБ также не существует. Обезопасить себя можно хотя бы от повторного заражения, не целуясь, не пользуясь чужой посудой, едой, зубными щётками и другими личными вещами.

При появлении каких-либо симптомов заболевания следует обратиться к врачу или самостоятельно прийти в лабораторию, чтобы сдать анализы на выявление ВЭБ.

Если заражение обнаружено (острая фаза), то нужно отказаться от выхода на работу, посещения общественных мест, потому что вы становитесь распространителем инфекции, обеспечить себе покой, обильное питьё, хорошо питаться. При возникновении тяжёлых симптомов следует немедленно обратиться к врачу — будет назначено симптоматическое лечение, поддерживающая терапия.

В обычной жизни хорошей профилактикой станет укрепление иммунитета — спорт, здоровый образ жизни, отказ от ежедневного применения дезинфицирующих средств, например — спиртовых гелей, антибактериального мыла и подобных. Ваш иммунитет должен ежедневно испытывать напряжение, чтобы «оставаться в форме», а иммунный ответ был высоким.

Стоимость тестирование на вирус Эпштейна—Барр в АО «СЗДЦМ»

В АО «СЗДЦМ» вы сможете пройти все тесты на определение ВЭБ по низкой цене. Так как диагностика в большинстве случаев требует комплексного тестирования, исследования в медицинских центрах и лабораторных терминалах АО «СЗДЦМ» не станет финансово обременительным для вас — стоимость услуги в наших медучреждениях доступна для всех категорий населения.

Наши врачи-специалисты назначат вам только необходимые анализы, которые позволят поставить точный диагноз. Первое исследование и общий анализ крови можно сделать и без назначения врача, но последующие (если будут подозрения) мы рекомендуем делать только по назначению, чтобы не проводить бесполезных в вашем случае тестов.

Где сдать анализы на вирус Эпштейн—Барр

Сдать любые анализы на ВЭБ вы можете в наших медицинских центрах и лабораторных терминалах. Выбрать ближайшее к вам медучреждение можно по карте, таблице или выпадающему меню.

Рядом с названием медучреждения вы увидите точный адрес, часы работы, а по карте легко составить маршрут для посещения лаборатории на общественном транспорте или личном автомобиле.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Реактивация хронической герпесвирусной инфекции с возрастом

Р.П. Стоуи1, Е.В. Козлова2, Д.Л. Етман1, Д.М. Воллинг2, Дж.С. Гудвин2, Р. Глэзер3

1 Отделение патологии, Медицинское отделение Университета штата Техас, Галвестон

2 Терапевтическое отделение, Медицинское отделение Университета штата Техас, Галвестон

3 Отделение молекулярной вирусологии, иммунологии и медицинской генетики, Институт поведенческой медицины, Университет штата Огайо, Огайо

Для иммунной системы пожилых людей характерна клональная экспансия Т-лимфоцитов СЭ8+, активность существенной части которых направлена против вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) и цито-мегаловируса (ЦМВ). Пока не ясно, с чем связана такая экспансия: реактивацией вируса или накоплением лимфоцитов в процессе старения. Авторы изучили реактивацию герпесвирусов у лиц молодого и пожилого возраста, инфицированных одновременно ЦМВ и ВЭБ. Результаты проведения молекулярно-биологических и серологических методов исследования показали значительное повышение как частоты реактивации ВЭБ и ЦМВ, так и титра антител в целом. Нередко дезоксири-бонуклеиновая кислота (ДНК) ЦМВ выявлялась в моче пожилых людей, кроме того, у них была отмечена высокая вирусная нагрузка ВЭБ. В част-

ности у большинства пожилых людей была выявлена ДНК ВЭБ в плазме крови, что подтверждено частой транскрипции поздних структурных генов. Кроме того, в образцах для исследования, взятых у пожилых людей, были выявлены Т-лимфоциты СЭ8+, специфичные к структурным антигенам ВЭБ. При исследовании образцов крови и мочи, полученных в контрольной группе молодых пациентов: ДНК ВЭБ в плазме крови отсутствовала, в моче не выявлена ДНК ЦМВ, не отмечена экспрессия транс-криптов структурных генов вирусов и отсутствовали данные о Т-лимфоцитах СЭ8+, специфичных к структурным антигенам ВЭБ. Эти результаты показывают, что иммунная система пожилых людей утрачивает способность контролировать реактивацию ВЭБ и ЦМВ, что можно охарактеризовать уже не как латентное, а как хроническое явление.

Ключевые слова:

старение, вирус герпеса, вирус Эпштейна-Барр, цитомегаловирус

Chronic Herpesvirus Reactivation Occurs in Aging

R.P. Stowe1, E.V. Kozlova2, D.L. Yetman1, D.M. Walling2, J.S. Goodwin2, R. Glaser3

Research, The Ohio State University, Ohio

Key words:

aging, herpesvirus, Epstein-Barr virus, cytomegalovirus

Experimental gerontology. — 2007. — Vol. 42 (6). — P. 563-570.

В процессе старения постепенно аккумулируются Сй8 Т-лимфоциты, лишенные Сй28 — костимулирующей молекулы, играющей ключевую роль в распознавании антигена и трансдукции сигнала, индуцированного рецепторами Т-лимфоцитов . Показано, что накопление субпопуляции Т-лимфоцитов Сй28- может быть обусловлено поражением ЦМВ-инфекцией , которая, как правило, происходит в детском возрасте и редко проявляется клинически. В дальнейшем ЦМВ персистирует, оставаясь в латентном состоянии в миелоидных клетках-предшественниках и, возможно, в эндотелиальных клетках . Частота выявления ЦМВ-специфических Т-лим-фоцитов может достигать 25% и более всего пула Т-лимфоцитов Сй8+, нередко они могут быть представлены в виде олигоклональной экспансии . Полагают, что столь значительные экспансии, направленные против одного вируса, могут снижать эффективность иммунного ответа на другие патогены .

Учитывая это, было показано, что иммунный ответ на ВЭБ-инфекцию существенно нарушен у ЦМВ-серопози-тивных пожилых людей . Вирусом Эпштейна-Барр и другими герпесвирусами инфицировано более 90% взрослого населения, и это ассоциировано с рядом заболеваний, таких как лимфома Беркитта, волосатая лейкоплакия полости рта, лимфогранулематоз . Подавление реактивации ВЭБ опосредуется цитотоксическими Т-лимфоцитами , а у ВЭБ-специфичных Т-лимфоцитов у пожилых людей, как было показано, нарушена эффекторная функция . Так, увеличение количества Т-лимфоцитов Сй8+, Сй28-наряду со сниженным количеством Т-лимфоцитов Сй4+ и слабой пролиферативной реакцией у пожилых людей ассо-циированно с высокой летальностью . Однако пока не ясно, связано ли увеличение Т-лимфоцитов, специфичных к герпесвирусам, с реактивацией этих вирусов в пожилом возрасте или оно лишь отражает простое накопление в процессе продолжающейся инфекции .

О реактивации ЦМВ и ВЭБ у пожилых людей известно мало. У них были обнаружены повышенные титры противовирусных антител к ЦМВ и ВЭБ ; это позволяет предположить, что снижение клеточного ответа вызывает активацию экспрессии вирусного белка и усиление репликации вируса. Однако прямых доказательств правильности такого предположения нет. В исследованиях не удалось выявить ДНК ЦМВ в крови у пожилых людей , хотя частота выявления у них ВЭБ-содержащих лимфобласто-идных клеточных линий оказалась достоверно повышенной . Кроме того, неожиданным оказалось также высокое содержание ДНК ВЭБ в крови пожилых людей .

Результаты, полученные авторами, говорят о том, что у пожилых людей происходит процесс хронической реактивации ЦМВ и ВЭБ. Эти данные позволяют по-новому взглянуть на реактивацию ВЭБ и ЦМВ при старении и объяснить возрастное увеличение вирус-специфических T-лимфоцитов CD8+.

Методы

Пациенты

Пациентов отбирали из практически здоровых пожилых добровольцев старше 55 лет, проживающих в районе Хьюстон-Галвестон и согласных участвовать в фундаментальных исследованиях или клинических испытаниях (SeaLy Center при медицинском отделении Техасского университета в Галвестоне). Образцы крови брали у 11 добровольцев в возрасте от 66 до 83 лет (средний возраст 76±5 лет), не страдающих заболеваниями иммунной системы и не принимающих препараты с иммуномодулирующей активностью. В исследование были включены люди молодого возраста (25-55 лет), также проживающие в районе Хьюстон-Галвестон. Поскольку авторы могли сразу брать лишь кровь и мочу на анализ в контрольной группе, количество добровольцев в ней было больше (n=31). Все образцы крови и мочи брали между 7 и 9 часами утра, хранили и исследовали при одинаковых условиях. Проведение исследования было разрешено наблюдательной комиссией медицинского отделения Техасского университета. Участники исследования дали информированное согласие.

Определение титра противовирусных антител

Титры противовирусных антител определяли методом непрямой иммунофлюоресценции . Для определения титра антител класса иммуноглобулинов G к капсидному антигену ВЭБ, раннему антигену, ядерному антигену ВЭБ (EBNA) и ЦМВ использовали коммерческие готовые предметные стекла с субстратом и контрольные сыворотки (Microgen Laboratories, La Marque, TX, and Bion Enterprises, Park Ridge, IL). Все образцы были обработаны слепым методом.

Определение уровня цитокинов методом проточной

цитометрии

Внутриклеточные цитокины окрашивали по методике, описанной ранее . Мононуклеары периферической крови, изолированные из цельной гепаринизиро-ванной крови, подвергали сразу стимуляции HLA-A*0201-рестриктированными эпитопными пептидами (10 мкг/мл

Ф

ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ: новости, мнения, обучение №3 2013

на 1 пептид) или фосфатно-буферным раствором (контроль). Использованы следующие пептиды и последовательности (в скобках):

■ ВЭБ-литический цикл:

• BMLF-1 (GLCTLVAML);

• gp110 (ILIYNGWYA);

• gp350 (VLQWASLAV).

■ ВЭБ-латентный цикл:

• EBNA-3A (SVRDRLARL);

• LMP-2A (CLGGLLTMV).

ЦМВ pp65, соответствующие остаткам 495-503 (NLVPMVATV), также были использованы для стимуляции T-лимфоцитов CD8+. В каждую пробирку добавляли кости-мулирующие моноклональные антитела (мАт) — CD28+ и CD49d мАт (1 мкг/мл каждого вида) (BD Biosciences), включая контрольные пробирки с фосфатно-буферным раствором. Пробирки встряхивали и инкубировали в течение б ч при 37 0С в атмосфере 5% CO2 с добавлением брефелдина A (10 мкг/мл) в течение последних 5 ч. После стимуляции клетки отмывали в фосфатно-буферном растворе, инкубировали в течение 5 мин при 37 «С в 0,02% растворе этилендиаминтетрауксусной кислоты и вновь отмывали. Клетки затем инкубировали в течение 10 мин в растворе FACSPerm (BD Biosciences), отмывали и окрашивали антителами к интерферону-у (IFN-y) (PE), CD8 (PerCP), CD69 (APC). Образцы фиксировали в 1% растворе параформальдегида и анализировали с помощью цито-метра FACSCalibur и компьютерной программы CellQuest (BD Biosciences). Данные проточной цитометрии анализировали и представляли с помощью программы Flow Jo Software (Tree Star, San Carlos, CA), для каждого образца анализировали 50 тыс. событий.

Экстракция нуклеиновых кислот и полимеразная цепная реакция в реальном режиме времени (количественная полимеразная цепная реакция)

Для определения вирусной нагрузки и экспрессии генов ВЭБ B-лимфоциты изолировали от мононуклеарных клеток периферической крови с помощью магнитных бус (бусы, нагруженные антителами к CD19, Dynal Inc., Lake Success, NY) и сразу замораживали и хранили при -80 «С. Выделяли рибонуклеиновую кислоту (РНК) из 1xl06 B-лимфоцитов в растворе тризол (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) с добавлением гликогена (Roche, Pleasanton, CA). Повышение экспрессии генов путем амплификации с помощью полиме-разной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени осуществляли по описанной ниже методике.

Для экстракции ДНК к нижней органической фазе добавляли этанол, и полученную суспензию центрифугировали в течение 5 мин при 2000 g. 100 мкл 0,1 M раствора натрия цитрата в 10% этаноле добавляли в осадок в пробирке после центрифугирования, инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре и центрифугировали. Этот этап повторяли 3 раза. После центрифугирования осадок, содержащий ДНК, отмывали 75% этанолом и ресуспендиро-вали в 500 мкл трис-буфере с этилендиаминтетрауксусной кислотой. Добавляли 25 мкл 10% додецилсульфата натрия

и 25 мкл протеинкиназы K (10 мг/мл маточного раствора) и помещали в термостат на ночь при 37 °С. ДНК экстрагировали путем обработки фенолом/хлороформом и осаждали в 3 М растворе калия ацетата с добавлением 95% этанола при 80 °С в течение 30 мин. ДНК осаждали путем центрифугирования, отмывали и ресуспендировали в дистиллированной воде.

По 3 мл каждого образца мочи (для исследования на ЦМВ) или 1 мл плазмы (для исследования на ВЭБ) концентрировали соответственно до 140 и 200 мкл путем центрифугирования с помощью концентратора Microsep 100K (Pall FiLtron Corp., Northborough, MA). Экстракцию геномной/ вирусной ДНК из концентрированной мочи выполняли с применением набора QIAamp Viral RNA (Qiagen Inc., Santa Clarita, CA), ДНК из концентрированной плазмы выделяли с помощью набора QIAamp 96 DNA blood (Qiagen). Количество ДНК ВЭБ определяли с помощью ПЦР в реальном времени, используя детектор последовательностей ABI 7700 или термоциклер Strategene MX3005P, как описано в . Для количественного определения ДНК ЦМВ использовали ту же методику, но с праймерами, специфичными к непосредственно ранним генам . Пределом детекции для ПЦР в реальном времени были 2-10 копий.

Амплификация с помощью полимеразной цепной реакции в реальном режиме времени

Для определения транскрипции вирусного гена образец РНК обрабатывали ДНКазой и подвергали обратной транскрипции в комплементарную ДНК с помощью прай-меров, специфичных к олигодеокситиминовому нуклеотиду и EBER1, и обратной транскриптазы вируса миелобластоза птиц (Promega, Madison, WI). Каждый образец комплементарной ДНК подвергали амплификации с помощью гнездовой ПЦР, используя наборы праймеров, специфичных к 9 генам ВЭБ: EBER-1, EBNA-1 Qp, LMP-1, EBNA-1 Cp/Wp, EBNA-2, BZLF-1, SM, EBNA-1 Fp и gp220. За исключением гена EBER-1, все праймеры были сконструированы из экзонных последовательностей гена, замыкающих интроны, которые удаляются в процессе сплайсинга транскрипта матричной РНК во время трансляционной экспрессии гена . Амплификацию гена EBER-1 комплементарной ДНК выполняли параллельно с амплификацией РНК, не обработанной обратной транскриптазой; последняя служила в качестве контроля контаминации РНК молекулами ДНК.

Выполнено по 40 циклов амплификации для инициальной и гнездовой реакциям с использованием Vent ДНК-полимеразы (New England Biolabs, Ipswich, MA) и циклера Robo-Cycler Strategene. Для предупреждения и выявления контаминации реакции ПЦР in vitro применяли стандартную методику. Амплифицированные продукты реакции идентифицировали по размерам с помощью электрофореза в агарозном геле в присутствии этидия бромида. Специфичность продуктов амплификации демонстрировали методом блот-гибридизации по Саузерну с меченным 32P олигонуклеотидным зондом для последовательностей, внутренних по отношению к тем, которые используются для амплификации.

Журнал для непрерывного медицинского образования врачей

Статистический анализ

Статистическая обработка данных выполнена с помощью компьютерной программы SigmaStat v2.03 (SPSS, Chicago, IL). Поскольку для определения титров антител применяли метод серийных разведений, для уменьшения дисперсии при сравнении статистических данных был осуществлен переход на логарифм по основанию 2. Для сравнения между группами использовали У-критерий Манна-Уитни. Данные, если они приведены, выражены как среднее+SE, а значения критерия p<0,05 приняты за статистически значимые.

Результаты

Титры антител к вирусу Эпштейна-Барр и цитомегаловирусу

Все пациенты, включенные в данное исследование, были серопозитивными по ВЭБ и ЦМВ, что свидетельствовало о перенесенной в прошлом инфекции. Как показано в табл. 1, группа пожилых пациентов достоверно отличалась по уровню раннего антигена ВЭБ и ЦМВ от группы молодых пациентов. Титры капсидного антигена ВЭБ колебались в пределах 40-2560 у пожилых пациентов (n=35 образцов) и в пределах 40-640 у молодых практически здоровых пациентов (n=31 образец). Для раннего антигена ВЭБ титры колебались от <10 до 640 у пожилых и от <10 до 40 у молодых. Для ядерного антигена ВЭБ титры как у пожилых, так и у молодых пациентов колебались от <4 до 64. Для ЦМВ титры у пожилых пациентов колебались от 160 до >640, у молодых — от 10 до 160.

T-лимфоциты CD8, специфичные к герпесвирусам

Из 11 пожилых пациентов, включенных в исследование, у 8 выявлены HLA-A*0201 (73%). Из крови этих 8 пациентов было получено 17 образцов мононуклеарных клеток крови, которые стимулировали ВЭБ- и ЦМВ-специфическими пептидами или фосфатно-буферным раствором (контроль), а затем анализировали на синтез CD8+, CD69+ и внутриклеточного IFN-y. Положительные результаты — отчетливая экспрессия CD69+ и отсутствие или слабое окрашивание специфическими красителями. На рис. 1 показана максимальная частота ВЭБ- и ЦМВ-специфических T-лимфоцитов CD8+ у пожилых доноров. Наиболее часто сенсибилизированные к одному белку T-лимфоциты CD8+ пожилых людей были специфичны к pp65 (13,2%). Реже был ответ на BMLF, LMP-2A и EBNA-3A (4,6; 3,8 и 2,6% соответственно). В группе молодых пациентов, у которых присутствовали HLA-A*0201+ (v=19),

Рис. 1. Частота выявления T-лимфоцитов CD8, специфичных к герпесвирусам, у практически здоровых людей пожилого возраста. В каждый анализ было включено 50 тыс. клеток. Частота выявления T-лимфоцитов CD8+ указывает на процентную долю CD69- и IFN-y-положительных клеток после стимуляции А*0201-рестриктированными белками, к ВЭБ (лизины и латентные протеины) и ЦМВ (pp65)

рр65-ответ также доминировал с максимальной частотой, равной 2,6%. В группе молодых пациентов наиболее выраженный ответ на один пептид проявился на ЕВМ-3А, менее выраженный — на ВМ^, хотя средняя частота для ВМ^ была достоверно выше, чем любой другой кодируемый ВЭБ-белок. Обобщенные результаты ответа на пептиды ВЭБ и ЦМВ для пожилых и молодых (контрольная группа) пациентов приведены в табл. 2. В целом значительно более выраженный ответ отмечен на антигены ВЭБ и ЦМВ у пожилых пациентов по сравнению с молодыми.

Вирусная нагрузка

Для определения вирусной нагрузки в периферической крови В-лимфоциты, выделенные из крови, были исследованы методом ПЦР в реальном режиме времени. В образцах, полученных от пожилых пациентов (п=28), количество копий ДНК ВЭБ колебалось от <50 до 1 943 650 геномов на 106 В-лимфоцитов (в среднем 175 101+90 710). В образцах, взятых у молодых пациентов (п=24 образца), количество копий ДНК ВЭБ в среднем составило 15+9 на 106 В-лимфоцитов (от уровня, не поддающегося детекции, до 228 геномов), что было близко к пределу разрешающей способности метода ПЦР. В целом вирусная нагрузка у пожилых пациентов была достоверно выше (р<0,001), чем у молодых.

Количество ДНК ВЭБ определяли также в образцах плазмы крови. Присутствие ДНК ВЭБ в плазме крови

Ф

Таблица 1. Возрастные изменения титров противовирусных антител*

Возрастная группа Молодые р-значение

Капсидный антиген вируса Эпштейна-Барр 7,0±0,3 6,2±0,2 0,154

Ранние антигены вируса Эпштейна-Барр 4,5±0,3 3,0±0,2 <0,001

Ядерный антиген вируса Эпштейна-Барр 4,0±0,3 3,5±0,4 0,253

ЦМВ 9,2±0,3 5,2±0,3 <0,001

Примечание. * — титры антител к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр, раннему антигену вируса Эпштейна-Барр, ядерному антигену вируса Эпштейна-Барр и цитомегаловирусу.

ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ: новости, мнения, обучение №3 2013

Таблица 2. Сравнительная частота выявления в периферической крови Т-лимфоцитов 0Р8+, специфичных к герпесвирусам

Пептид Средняя частота (пределы) р-значение

пожилые молодые

BMLF 0,50 (0-4,60) 0,20 (0-0,50) 0,014

EBNA-3A 0,40 (0-2,60) 0,08 (0-1,0) 0,005

gp110 0,10 (0-0,40) bda 0,019

gp350 0,10 (0-0,40) bd 0,018

LMP-2A 0,50 (0-3,80) bd 0,001

pp65 1,10 (0-13,2) 0,20 (0-2,60) 0,001

abelow detection — не определялся.

было неожиданно обнаружено у 7 (55%) из 11 пожилых пациентов, но ни у одного из 31 молодого пациента. Из 35 образцов плазмы пожилых пациентов 13 (37%) были ВЭБ-ДНК-положительными, количество копий генома ВЭБ в плазме крови колебалось в пределах 10-400 в 1 мл и было достоверно больше у пожилых пациентов (р<0,001, точный критерий Фишера).

Поскольку ДНК ЦМВ не была выявлена ни в одном образце мононуклеарных клеток крови (данные не приведены), авторы экстрагировали ДНК из мочи, так как она служит альтернативным образцом для диагностики ЦМВ-инфекции. ДНК ЦМВ в моче пожилых пациентов обнаружили в 17 (57%) из 30 образцов. Количество копий ДНК ЦМВ колебалось от уровня, не поддающегося детекции, до 20 300 (в среднем 2026+902). В целом 10 (91%) из 11 пожилых пациентов выделяли с мочой ДНК ЦМВ в течение 6-месячного периода наблюдения. В отличие от пожилых, у молодых пациентов ДНК ЦМВ не была выявлена ни в 1 образце мочи. Количество ДНК ЦМВ у пожилых пациентов было достоверно выше. ДНК ЦМВ гораздо чаще выявлялось в группе пожилых ^<0,001).

Анализ рибонуклеиновой кислоты вируса Эпштейна-Барр

Для амплификации с помощью ПЦР в реальном времени были выбраны РНК 9 генов вируса. Чтобы определить, нахо-

дится ли вирус в состоянии латенции I-III (EBER-1, EBNA-1 Qp and Cp/Wp, LMP-1, EBNA-2) или он активен, то есть присутствуют непосредственно ранние репликативные (BZLF-1), ранние репликативные (SM, EBNA-1 Fp) и поздние репликативные (gp220) транскрипты, можно использовать паттерн экспрессии генов ВЭБ. Суммарные данные, полученные при исследовании образцов всех пациентов, приведены в табл. 3. У всех пожилых пациентов отмечен высокий уровень экспрессии EBER-1, неполиаденилированной вирусной РНК, которая транскрибирована при высоких уровнях в ВЭБ-инфицированных B-лимфоцитах, что соответствовало нашим данным о высоком значении копий ДНК ВЭБ в B-лимфоцитах крови. Экспрессия белка gp220 выявлялась почти всегда (у 9 из 11 пациентов, 82%), транскрипты gp220 выявлены в 15 из 28 образцов (54%). Экспрессия LMP-1 была следующей по частоте среди экспрессируемых генов и выявлена в образцах 8 из 11 пожилых пациентов (73%); 10 (36%) из 28 образцов оказались LMP-1-положительными. Экспрессия EBNA-1 (Cp/W/p; Fp; и Qp) также наблюдалась часто. BZLF-1, EBNA-2 и SM выявляли реже; образцы одного пациента оказались положительными как по SM, так и EBNA-2, в то время как BZLF-1 экспрессировался в образцах другого пациента.

В отличие от этих данных литическую и латентную экспрессию генов ВЭБ у молодых пациентов выявляли редко

Таблица 3. Суммарные результаты, полученные при исследовании образцов методом гнездовой полимеразной цепной реакции. Анализ экспрессии генов вируса Эпштейна-Барр при старении

Журнал для непрерывного медицинского образования врачей

Таблица 4. Суммарные результаты исследования экспрессии генов вируса Эпштейна-Барр у практически здоровых молодых пациентов

Ф

(табл. 4). Матричная РНК р-актина была амплифицирована во всех 24 (100%) образцах, что подтверждает высокое качество РНК, экстрагированной из образцов. EBER-1 выявлен в 19 (70,3%) из 24 образцов. Образцы, полученные от пациентов 12, 13, 21 и 24, были Qp-положительными. Два других образца были Fp-положительными (пациенты 23 и 24), в то время как в образцах от пациентов 14 и 11 были выявлены соответственно LMP-1 и BZLF-1. В целом в 7 образцах, полученных у молодых пациентов контрольной группы, отмечена литическая или латентная экспрессия генов ВЭБ.

Обсуждение

При проведении данного исследования был получен ряд важных результатов.

Во-первых, при старении часто происходит реактивация ЦМВ, о чем свидетельствуют повышенный титр антител к ЦМВ и наличие ДНК ЦМВ в моче пациентов. Проведенные ранее исследования по выявлению ЦМВ в крови дали отрицательные результаты . Однако ЦМВ удалось обнаружить в моче новорожденных, которые были инфицированы во внутриутробном периоде , и исследование мочи

методом ПЦР подходило для выявления ЦМВ у больных с ослабленным иммунитетом . В связи с этим метод ПЦР был использован для непосредственного выявления ЦМВ в моче, и в результате неожиданно оказалось, что у пожилых людей с мочой часто выделяется ЦМВ, в то время как ни в одном из образцов мочи молодых пациентов ДНК ЦМВ не была выявлена. Результаты, полученные авторами у молодых пациентов, соответствуют нашим более раним данным, согласно которым ДНК ЦМВ была выявлена лишь у 1 из 81 человека . Поскольку обнаружить ЦМВ в крови пожилых пациентов почти не удается, результаты, полученные авторами в данном исследовании, свидетельствуют о том, что хотя ЦМВ у пожилых людей часто реактивируется, инфекция у них протекает субклинически.

Во-вторых, с возрастом происходит хроническая реактивация ВЭБ. Повышенный титр антител к раннему антигену ВЭБ соответствует результатам наших более ранних исследований . Хотя повышение титра антител к капсид-ному антигену ВЭБ в данном исследовании ниже уровня достоверности, в выполненном авторами ранее исследовании, в которое было включено больше пациентов, было показано, что уровень антител к капсидному антигену ВЭБ у пожилых людей достоверно выше . Эти результаты

ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ: новости, мнения, обучение №3 2013

свидетельствуют о том, что в результате большей интенсивности реактивации ВЭБ повышаются и синтез вирусных белков, и репликация вируса. Это мнение подтверждается нашими результатами, которые показывают наличие в крови T-лимфоцитов, специфичных как к латентным, так и к лити-ческим эпитопам ВЭБ. В более ранних исследованиях на взрослых ВЭБ-серопозитивных пациентах было показано превалирование T-лимфоцитов CD8+, нацеленных на ранние литические эпитопы , в то время как у пожилых пациентов встречаются и могут превалировать T-лимфоциты, нацеленные на латентные эпитопы ВЭБ (например, EBNA-3A, LMP-2A) . Авторы выявили не только детектируемый ответ на эпитопы EBNA-3A и LMP-2A, но и T-лимфоциты, реактивные по отношению к структурным антигенам ВЭБ — глико-протеинам gp350 и gp110. Эти результаты свидетельствуют о том, что инфицированные ВЭБ-клетки более не ограничиваются экспрессией набора вирусных генов, которые определяют латентность, а экспрессируют уже полный паттерн латентных и литических генов.

Для изучения этого вопроса авторы исследовали B-лимфоциты крови с помощью молекулярно-биологических методов, которые выявили частую транскрипцию гликопро-теина gp220 у рассмотренных авторами пожилых людей (Примечание: гликопротеин gp220/350 ВЭБ — основной гликопротеин, ассоциированный с оболочкой ВЭБ, а белок с молекулярной массой 220 кДа является результатом сплайсинга его РНК). В крови, взятой у молодых доноров, транскрипция вируса была в основном ограничена белками LMP-2A и EBNA-1 . Недавно появилось сообщение об экспрессии гликопротеина gp350 у больных инфекционным мононуклеозом, а также у пациентов с трансплантированными органами и отсутствии этого гликопротеина в крови здоровых людей . Была выявлена неожиданно высокая экспрессия LMP-1. Транскрипты LMP-1 в типичных случаях обнаруживают лишь у пациентов с повышенной вирусной нагрузкой, например у больных после трансплантации органов , и они отсутствуют у здоровых людей молодого возраста .

Антиген LMP-1 действует как онкоген, активирующий клеточные факторы транскрипции семейства NF-kB и AP-1 и клеточные молекулы адгезии, образование цитокинов и пролиферацию B-лимфоцитов . Авторы наблюдали также коэкспрессию EBNA-2 и LMP-1 в 1 образце крови. Экспрессия этих 2 транскриптов присуща иммунобласти-ческому фенотипу (т.е. III паттерн латенции), для которого характерна активация процесса образования молекул адгезии (т.е. CD23, ICAM-1, LFA-1) . В свете этого в будущем предстоит выяснить, имеют ли B-лимфоциты пожилых людей иммунобластический фенотип.

Повышенная экспрессия литических и латентных генов ВЭБ свидетельствует о том, что в крови пожилых людей должна быть повышена вирусная нагрузка, и исследование методом ПЦР подтвердило это предположение. Она также указывает на то, что происходит продуктивная репликация вируса (т.е. геном линейный). Для дальнейшего изучения этого вопроса авторы подвергли анализу плазму крови на присутствие в ней ДНК ВЭБ и выявили только один ДНК-положительный образец. Однако в нашем исследовании

ДНК ВЭБ присутствовала в значительно большем количестве образцов плазмы крови. Авторы объясняют это тем, что наш метод был более чувствительным, так как авторы концентрировали больший объем плазмы перед экстракцией ДНК. В результате ДНК ВЭБ была выявлена у значительно большей части пожилых пациентов (55%). Важно отметить, что ДНК ВЭБ часто обнаруживают у больных ВЭБ-ассоциированными заболеваниями , и присутствие ДНК ВЭБ в плазме крови имеет прогностическое значение .

В целом полученные результаты подтверждают концепцию о том, что экспансия вирусоспецифических T-лимфоцитов CD8+ — результат реактивации герпесвирусов, связанный с возрастом. Однако реактивация этих вирусов может быть спровоцирована также стрессом, связанным с медицинским обследованием и полетом в условиях невесомости ; авторам удалось показать, что повышение количества вирусоспецифических T-лимфоцитов CD8+ и реактивация герпесвирусов происходит у астронавтов . Стресс — частый спутник пожилого возраста (утрата близкого человека, уход за больным) и, как было показано, он вызывает существенное нарушение иммунного ответа . Таким образом, периодическая реактивация вируса вследствие стресса способствует увеличению с возрастом пула T-лимфоцитов, специфичных к герпесвирусам. Необходимо проведение дальнейших исследований для понимания эффектов усиленной реактивации герпесвирусов у здоровых пожилых людей.

Выражение признательности

Выражаем признательность K. Komanduri (Техасский университет, Раковый центр М.Д. Андерсона в Хьюстоне) за консультирование по техническим вопросам. Авторы признательны также Сузан Минелло, сотруднице Геронтоло-гического центра Сили за помощь по привлечению пациентов в исследование. Исследование выполнено при поддержке Национального института геронтологии (AG21247, AG16321), Национального института онкологии США (CA100243), Герон-тологического центра Сили при медицинском отделении Техасского университета, а также отчасти Национальным управлением по аэронавтике и исследованию космического пространства (NAS9-01006, NNJ06HB73A, NNJ04HD75G). Исследование было выполнено в Клиническом исследовательском центре Медицинского филиала Техасского университета на средства гранта M01RR00073, предоставленного Национальным центром научно-исследовательских ресурсов, NIH, USPHS.

Примечания

Отказ издательства от ответственности. Данный файл представляет собой неотредактированную рукопись в формате PDF, которая поступила для публикации. По просьбе наших заказчиков авторы предоставили раннюю версию рукописи. Рукопись подлежит редактированию и набору, прежде чем будет опубликована в окончательном виде, позволяющем ссылаться на нее. Просим учесть, что при работе с рукописью вы можете встретить ошибки, которые могут исказить содержание, и журнал не несет за это никакой юридической ответственности.

Журнал для непрерывного медицинского образования врачей

СВЕДЕНИЯ О ВЕДУШЕМ АВТОРЕ

Рэймонд П. Стоуи (Raymond P. Stowe) — доктор медицины, Лаборатории Микроген, Ла-Марк, Техас, США E-mail: rpstowe@microgenLabs.com

ЛИТЕРАТУРА

2. Bruggeman C.A. Cytomegalovirus and Latency: an overview // Virchows Arch. B Cell Pathol. IncL. Mol. Pathol. — 1993. -Vol. 64. — P. 325-333.

21. Lechowicz M.J., Lin L., Ambinder R.F. Epstein-Barr virus DNA in body fluids // Curr. Opin. Oncol. — 2002. — Vol. 14. -P. 533-537.

22. Lenschow D.J., Walunas T.L., Bluestone J.A. CD28/B7 system of T cell costimulation // Annu. Rev. Immunol. — 1996. -Vol. 14. — P. 233-258.

29. Pawelec G. Immunosenescence and vaccination // Immun. Ageing. — 2005. — Vol. 2. — P. 16.

ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ: новости, мнения, обучение №3 2013

30. Pawelec G., Akbar A., Caruso C. et al. Is immunosenes-cence infectious? // Trends Immunol. — 2004. — Vol. 25. -P. 406-410.

31. Pawelec G., Ferguson F.G., WikbyA. The SENIEUR protocol after 16 years // Mech. Ageing Dev. — 2001. — Vol. 122. -P. 132-134.

46. Weymouth L.A., Gomolin I.H., Brennan T. et al. Cytomegalovirus antibody in the elderly // Intervirology. — 1990. -Vol. 31. — P. 223-229.