Холерного вибриона

5.2. Порядок исследования При бактериологическом исследовании на холеру используют различные питательные среды: жидкие среды обогащения, щелочной агар, элективные дифференциально-диагностические среды и набор сред для идентификации. Применяют сухие среды производственного выпуска, имеющие номера госрегистрации и лицензии, или среды, консерванты, приготовленные по рецептуре и технологии, изложенной в разделе 7. Перечень производственных питательных сред и диагностических препаратов для выделения и идентификации возбудителя холеры приведен в Приложении 5. При транспортировании и хранении медицинских иммунобиологических препаратов следует руководствоваться СП 3.3.2.028-95. Используемые для диагностики холеры питательные среды подлежат бактериологическому контролю в установленном порядке. Агаровые среды перед использованием должны быть тщательно подсушены. Посев делают так, чтобы получить рост в виде изолированных колоний. Все посевы инкубируют при температуре (37,0 +/- 0,5) ёC. Посевы исследуемого материала на всех этапах выращивают в 1-процентной пептонной воде 6 — 8 ч, в пептонной воде с теллуритом калия — 12 — 18 ч, на щелочном агаре — не менее 14 — 16 ч, а на плотных элективных средах — 18 — 24 ч. Теллурит калия следует добавлять в 1-процентную пептонную воду с рН не ниже 8,3 +/- 0,1, до внесения исследуемого материала. Продолжительность хранения рабочего раствора теллурита калия (1:1000) — 7 дней, а питательных сред с теллуритом калия — не более 2 суток при условии содержания их в холодильнике. 5.2.1. Исследование проб от больных и вибриононосителей, секционного материала (рис. 1). —————————————————————— | Исследуемый материал | —————————————————————— | | | | | | \/ \/ \/ ——— ——————————>——————— |ЩА, ЭС| | I | —— |Ускоренные методы: | ——— ————>| II |———->|- МФА | | | —— |- РИВ | | \/ | |- РНГА | | ——— \/ |- ПЦР | | |ЩА, ЭС| —— ——————— | ——— | ЩА | | | —— | | | \/ \/ \/ ————————————— |- отбор колоний | |- высев подозрительных колоний на ЩА | |и ПУС | ————————————— | \/ —————————- |Отбор культур по ПУС и ОП | —————————- | \/ ————————————————————- | | | | | | \/ \/ \/ \/ \/ \/ —— ——- ——- —— —— —— |ПУС+| |ПУС+*| |ОП+* | |ПУС-| |ПУС-| |ПУС+| |ОП+ | ——- ——- |ОП+ | |ОП- | |ОП- | —— —— —— —— | | | | ———————————— \/ \/ | ———— ———— \/ |Не | |Исследуют| ——————————- |исследуют| |на | —| ОРА с сыворотками O1 и O139 |———¬ ———— |кишечную | |+ ——————————- — | |группу | | | ———— | | | | \/ \/ ————————————— ———————— |Сокращенная схема идентификации: | |Определение | |- морфология и подвижность микробных | |принадлежности к роду | |клеток | |Vibrio, виду | |- ОП | |V. cholerae или другим| |- O/F тест и отношение к отдельным | |видам патогенных | |углеводам (табл. 4) | |вибрионов | |- МФА | ———————— |- РИВ | ———————— |- РА с сыворотками O1, Инаба, Огава, | |Условные обозначения: | |РО или слайд-агглютинация с O139 | |I и II — среда | |- чувствительность к фагам холерным | |накопления; ЩА — | |классическому и эльтор | |щелочной агар; ЭС — | |Дополнительные признаки биовара | |элективная среда для | |V. cholerae: | |выделения холерных | |- гемагглютинация | |вибрионов; ПУС — | |- чувствительность к полимиксину В | |полиуглеводная среда; | |50 ед./мл | |ОП — оксидазная проба;| |- реакция Фогес — Проскауэра | |ОРА — ориентировочная | |Определение антибиотикограммы | |реакция агглютинации; | |Оценка эпидемической значимости: | |РА — развернутая | |- гемолитическая активность по Грейгу| |реакция агглютинации; | |- чувствительность к фагам холерным | |МФА — метод | |эльтор ctх+ и ctx- | |флюоресцирующих | |- ПЦР, ДНК-зондирование | |антител; РИВ — реакция| |- токсигенность на кроликах-сосунках | |иммобилизации | |Уточнение родовой и видовой | |вибрионов; РНГА — | |принадлежности атипичных культур по | |реакция непрямой | |расширенному набору признаков | |гемагглютинации; ПЦР -| |(табл. 2, 3) | |полимеразная цепная | ————————————— |реакция; | |* — в случае отбора | |колоний только на ПУС | |или ЩА. | ———————— Рис. 1. Схема лабораторного исследования на холеру I этап Испражнения, рвотные массы больных, а также содержимое кишечника, желчного пузыря и суспензию кусочков слизистой тонкого кишечника трупа в объеме 0,5 — 1,0 мл засевают пипеткой в 50 — 100 мл накопительной среды, петлей — на щелочной агар и одну из элективных сред (СЭДХ, TCBS). При исследовании материала от больных с подозрением на заболевание холерой не допускается использование 1-процентной пептонной воды с теллуритом калия в качестве накопительной среды. В случае поступления материала от больных с подозрением на холеру целесообразно применять ускоренные методы исследования: иммунолюминесцентный, иммобилизацию и ПЦР со специфическими праймерами (см. раздел 6). Материал от подозреваемых на вибриононосительство засевают в 50 мл среды накопления при индивидуальных анализах и в 100 мл — при групповых, объединяя в один флакон по 0,5 — 1,0 мл пробы не более чем от 5 человек. К групповым посевам прибегают в редких случаях при проведении массовых обследований на вибриононосительство. Материал, доставленный в 5 мл 1-процентной пептонной воды, полностью используют для посева в 50 мл среды накопления. В случае поступления в лабораторию материала, забранного в 50 мл 1-процентной пептонной воды во флаконе, и доставки его не позже 2 ч после забора пробы флакон помещают в термостат на 6 ч для накопления возбудителя. При доставке материала в более поздние сроки 5 мл его засевают в 50 мл 1-процентной пептонной воды. В отдельных случаях, при бактериологическом исследовании материала от лиц, принимавших антибиотики, активные по отношению к возбудителю холеры, его засевают в 200 — 300 мл 1-процентной пептонной воды (предпочтительно в широкогорлые колбы) и на 2 чашки щелочного агара так, чтобы получить рост в виде изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 ёC в течение 24 ч, производя последовательные высевы через 8 — 10 ч инкубации с поверхностного слоя среды на пластинки щелочного агара. Использование второй среды обогащения в этом варианте исследования нецелесообразно. II этап (через 6 — 8 ч от начала исследования) С первой среды накопления делают высев на щелочной агар и одну из элективных сред и в 5 — 8 мл второй среды накопления. Пересевы в жидкие и на плотные среды делают с поверхности жидкой среды большой бактериологической петлей диаметром 5 мм. При отрицательных результатах исследования нативного материала ускоренными методами их повторяют после 6 ч инкубации первой среды накопления. III этап (через 12 — 16 ч от начала исследования) Высев со второй среды накопления на щелочной агар. В случае необходимости ускорения хода анализа материала от больного или подозрительного на заболевание холерой отбор колоний со щелочного агара, засеянного в начале исследования, можно начинать уже на этом этапе, в остальных случаях — на следующем. IV этап (через 18 — 24 ч от начала исследования) Отбор подозрительных на холерный вибрион колоний в посевах на плотные среды нативного материала, а также в высевах из 1-й и 2-й накопительных сред. Чашки с посевами просматривают в проходящем свете невооруженным глазом или с помощью лупы, а также (особенно в вечернее и ночное время) под стереоскопическим микроскопом в косо проходящем свете и отбирают подозрительные на вибрионы колонии для выделения и идентификации культуры. На щелочном агаре колонии холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп в типичной S-форме — круглые, гладкие, плоские, голубоватые, гомогенные, с ровными краями, прозрачные в проходящем свете и светло-серые с голубым или зеленоватым оттенком под стереоскопическим микроскопом в косо проходящем свете (Приложение 6). Колонии холерных вибрионов на элективных средах TCBS и СЭДХ имеют ярко-желтую окраску на зеленом или синем фоне среды, полупрозрачные. Размеры колоний на щелочном агаре через 10 — 12 ч инкубации обычно не превышают 1 мм, а к 18 — 24 ч достигают 2 — 3 мм в диаметре. Темпы формирования колоний холерных вибрионов на элективных средах несколько замедлены, поэтому просмотр посевов на СЭДХ или TCBS следует проводить не ранее чем через 18 — 20 ч инкубации, когда размеры их становятся близки к колониям, вырастающим на щелочном агаре. В отдельных случаях в посевах могут также встречаться атипичные колонии: мутные с плотным центром, пигментированные (коричневые или светло-желтые), мельчайшие коккоподобные, шероховатые. Следует иметь в виду, что состав и качество питательных сред оказывают влияние на величину и плотность колоний холерных вибрионов, а также на морфологию клеток. При отборе колоний можно использовать пробу на индофенолоксидазу с однокомпонентным реактивом (без альфа-нафтола) или с индикаторными бумажками из набора СИБ-1 для идентификации вибрионов. С колониями, обнаруженными на элективных средах, пробу на оксидазу ставить не рекомендуется. Подозрительные колонии проверяют в слайд-агглютинации с сывороткой холерной O1 в разведении 1:50 — 1:100. При положительной реакции и достаточном количестве подозрительных колоний ставят слайд-агглютинацию с варианто-специфическими сыворотками Инаба и Огава в том же разведении, приготавливают мазки для окраски по Граму и обработки флюоресцирующими иммуноглобулинами. При отрицательных результатах колонии, обнаруженные в посевах материала от больных, проверяют в слайд-агглютинации с холерными сыворотками O139 и РО. Положительная ориентировочная реакция агглютинации с холерной O1 сывороткой в разведении 1:100 и варианто-специфической в разведении 1:50 или положительная реакция с флюоресцирующими иммуноглобулинами в сочетании с морфологическими, культуральными признаками и специфической иммобилизацией позволяют выдать на соответствующем этапе предварительный ответ об обнаружении в исследуемом материале холерного вибриона O1, а в случае положительной реакции с сывороткой O139 — холерного вибриона O139 серогруппы. Подозрительные на вибрионы колонии, агглютинирующиеся и не агглютинирующиеся холерными O1 и O139 сыворотками, отсевают на одну из полиуглеводных сред (лактозосахарозная, Ресселя, Клиглера, маннозосахарозная или др.) и (или) на сектор пластинки щелочного агара для выделения чистой культуры, ее идентификации и определения чувствительности к антибиотикам. V этап (через 24 — 36 ч от начала исследования) Отбор культур для идентификации. На полиуглеводных средах отбирают культуры с типичными для вибрионов характером роста и изменениями: — на двууглеводных средах (лактозосахарозная, глюкозолактозная и Клиглер) наблюдается характерное для кислой реакции изменение цвета столбика при сохранении цвета скошенной части без образования газа, а также сероводорода, улавливаемого в среде Клиглера; — в маннозосахарозной среде за счет ферментации обоих углеводов окрашиваются и столбик, и скошенная часть, а также улавливается образование сероводорода. Культуры, выросшие на щелочном агаре, проверяют на наличие индофенолоксидазы. Определяют морфологию микроорганизмов и чистоту отобранных культур, выросших на щелочном агаре и полиуглеводных средах, с помощью окрашенных по Граму мазков. Культуры, дающие характерные изменения на полиуглеводных средах и положительные в пробе на оксидазу, проверяют в ориентировочной слайд-агглютинации с холерными сыворотками O1 в разведении 1:100, РО, Инаба и Огава — в разведении 1:50. При отрицательных результатах с этими сыворотками ставят слайд-агглютинацию с холерной сывороткой O139 серогруппы, используя ее в соответствии с инструкцией по применению. На основании положительных результатов агглютинации с сыворотками O1, Инаба или/и Огава выдают предварительный положительный ответ о выделении из исследуемого материала культуры холерного вибриона O1 соответствующего серовара. Если выделенная культура реагирует с холерной сывороткой O139 при отрицательных результатах с сыворотками O1 серогруппы, выдают ответ о выделении холерного вибриона O139 серогруппы. Проводят идентификацию выделенных на полиуглеводных средах или на щелочном агаре агглютинирующихся и не агглютинирующихся сыворотками O1, РО или O139 серогрупп оксидазопозитивных культур по сокращенной или полной схеме. VI этап (через 36 — 48 ч от начала исследования) Учитывают результаты идентификации и выдают окончательный ответ о выделении культуры холерного вибриона соответствующей серогруппы и биовара. Для холерных вибрионов O1 эпидемическую значимость оценивают по тестам гемолитической активности и чувствительности к фагам эльтор ctx+ и ctx-, а в специализированных учреждениях — по результатам ПЦР или генетического зондирования на присутствие в геноме выделенной культуры ctx AB гена, а также токсигенности на модели кроликов-сосунков. Эпидемическую значимость холерных вибрионов O139 серогруппы определяют по тем же тестам, кроме чувствительности к фагам эльтор ctx+ и ctx-. К окончанию этого этапа исследования должна быть определена антибиотикочувствительность выделенной культуры. При выделении от больного или вибриононосителя культуры холерного вибриона, не агглютинирующейся холерными сыворотками O1 и O139, выдают ответ о выделении холерных вибрионов не O1 и не O139. При наличии вибрионных агглютинирующих диагностических сывороток определяют принадлежность к другим серогруппам (О2 — О83). Идентификацию культур, агглютинирующихся РО-сывороткой, см. в разделе 5.3. 5.2.2. Исследование объектов окружающей среды. Схема анализа объектов окружающей среды отличается от схемы исследования материала от больных только на I этапе, II — VI этапы изложены выше. Вода поверхностных водоемов и водопроводная В зависимости от времени доставки пробы возможны следующие варианты посевов с целью первичного накопления вибрионов: — к исследуемой воде добавляют раствор основного пептона до 1-процентной концентрации, определяют рН, в случае необходимости подщелачивают 10-процентным раствором едкого натрия до рН 8,4 +/- 0,1. Время инкубации в 1-й среде накопления — 8 — 10 ч. Объем 2 среды накопления — 10 мл; время инкубации в среде без теллурита калия 6 ч, а с теллуритом калия — 18 — 20 ч; — в исследуемую воду добавляют раствор основного пептона до 1-процентной концентрации и теллурит калия из рабочего разведения 1:1000 до концентрации 1:100000 или 1:200000 в соответствии с данными проверки. Устанавливают рН — 8,4 +/- 0,1. Время инкубации 18 — 24 ч; вторая среда накопления — 10 мл среды без теллурита калия, время инкубации 6 — 8 ч; — исследование проб воды можно также проводить с использованием в качестве ингибитора посторонней флоры моющего средства «Прогресс» в концентрации 0,1 — 0,2%; — после добавления основного раствора пептона до 1-процентной концентрации и установления щелочной реакции пробы сохраняют при комнатной температуре (не выше 25 ёC) до утра (первая среда накопления). В начале следующего дня засевают 5 мл поверхностного слоя в 100 мл 1-процентной пептонной воды (вторая среда накопления) и делают высев на щелочной агар; высев со второй среды накопления производят через 6 — 8 ч инкубации; — воду фильтруют через мембранные фильтры N 2 или 3, смыв с которых сеют в накопительную среду и на агаровые пластинки. Из смыва с фильтра можно делать мазки для окраски флюоресцирующими холерными иммуноглобулинами, а также ставить РНГА, ПЦР со специфическими праймерами. При интенсивном бактериальном загрязнении проб можно использовать 3 среду накопления. Хозяйственно-бытовые сточные воды Сточные воды, доставленные в объеме 1 л, фильтруют через бумажный или матерчатый фильтр для освобождения от механических примесей (при необходимости). После добавления к пробам основного раствора пептона до 1-процентной концентрации устанавливают рН 8,4 +/- 0,1 и инкубируют в объемах по 500 мл 8 — 10 ч (1 среда накопления) или с добавлением теллурита калия 1:100000 (1:200000) — 18 — 24 ч. При заборе сточных вод марлевыми тампонами последние помещают в широкогорлые колбы или банки с накопительной средой (500 мл) и далее исследуют, как указано выше. Гидробионты Лягушку непосредственно перед исследованием обездвиживают уколом иглы в спинной мозг и фиксируют на препаровальной доске брюшком вверх. Поверхность брюшка обрабатывают спиртом и ножницами делают медиальный разрез. Желчный пузырь отсекают от печени, разрезают и делают отпечаток на пластинке щелочного агара. Остатки желчи вместе с желчным пузырем помещают во флаконы с 50 — 100 мл 1-процентной пептонной воды. Содержимое желудка засевают в 1-процентную пептонную воду, а внутренней поверхностью стенки делают отпечатки на агаровые пластинки. Посев кишечника делают таким же образом, отсекая несколько петель в верхнем, среднем и нижнем отделах кишечника. У крупных рыб в том же порядке засевают в накопительную среду содержимое желчного пузыря, желудка, кишечника и жабры. Мелких рыб (мальков) измельчают ножницами по 10 — 20 экз. в одной пробе и делают посев суспензии петлей на чашку с агаром и в 1-процентную пептонную воду. Дафний, циклопов и др. рачков растирают в ступке и засевают петлей в 1-процентную пептонную воду. У раков исследуют кишечник и жабры, делая посев содержимого в среду накопления, и слизистой стенки — отпечатком на агаровую среду. Пищевые продукты Безалкогольные напитки исследуют тем же методом, что и воду. Молоко в количестве 5 мл сеют в 50 — 100 мл среды накопления или к 0,5 л молока добавляют основной раствор пептона до 1-процентной концентрации его в молоке. Другие молочные продукты (кефир, сметану, творог, мороженое и т.д.) в количестве 5 — 10 мл засевают в 1-процентную пептонную воду. Твердые пищевые продукты измельчают, растирают в ступке с физиологическим раствором и засевают в количестве 10 г в 100 мл накопительной среды и петлей на агаровые среды. Масло засевают в жидкую среду накопления в количестве 5 — 10 г, размягчив его в термостате, или делают посев смыва с поверхности его кусков. После посева продукта устанавливают рН среды 8,4 +/- 0,1. Смывы с объектов внешней среды и мух засевают в 1-процентную пептонную воду и исследуют по обычной схеме. 5.2.3. Порядок исследования в условиях односменной работы лаборатории. При осуществлении эпиднадзора за холерой исследование материала от обследуемых контингентов может выполняться в следующих вариантах. В качестве 1-й или 2-й среды накопления используют 1-процентную пептонную воду (рН 8,4 +/- 0,1) с теллуритом калия в конечной концентрации 1:100000 — 1:200000 в соответствии с результатами его контроля. Вопрос выбора транспортной среды и порядка исследования решают в зависимости от разницы времени с момента взятия пробы до поступления ее в лабораторию. Примерная схема забора материала от больных в 1-процентную пептонную воду и порядок дальнейшего его исследования на холеру с учетом различного времени доставки в лабораторию представлены в табл. 1. В течение рабочей недели для отбора проб используют 1-процентную пептонную воду без теллурита калия в объеме 5 — 10 мл, во флаконах или пробирках (транспортная среда). Таблица 1 ПОРЯДОК ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВРЕМЕНИ ОТБОРА И ДОСТАВКИ ЕГО В ЛАБОРАТОРИЮ В 1% ПВ ————————————————————————————————————- |N |Время |Время |Среда |Назначение |1-я среда |2-я среда |Высев со | |вариантов|взятия |доставки в |для |среды |накопления |накопления. |2-й среды | | |материала |лабораторию|взятия | | |Высев с 1-й среды |накопления | | | | |проб | | |накопления | | |———|————|————|———|————-|————-|———————|————| |1 |6.00 — |До 10.00 |а) 1% ПВ |Среда |Среда с |Через 6 ч инкубации |В начале | | |10.00 | |50 мл |накопления |доставленны |пересев в 1% ПВ с |следующего | | | | |б) 1% ПВ | |м |ТК |рабочего | | | | |5 — 10 |Транспортная |материалом |и высев на щелочной |дня | | | | |мл |среда |Посев в |агар и (или) ЭС | | | | | | | |50 мл 1% ПВ | | | |———|————|————|———|————-|————-|———————|————| |2 |10.00 — |После |1% ПВ |Транспортная |Посев 5 — |9.00 следующего дня |Через 6 | | |до конца |10.00 |5 — 10 |среда |10 |пересев в 1% ПВ, |часов | | |рабочего |в течение |мл | |мл среды с |высев на щелочной |инкубации | | |дня |рабочего | | |материалом |агар и (или) ЭС | | | |лаборатории |дня | | |в | | | | | |лаборатори | | |50 мл 1% ПВ | | | | | |и | | |с ТК | | | |———|————|————|———|————-|————-|———————|————| |3 |По |До 10.00 |1% ПВ |Транспортная |Посев 5 — |Через 6 ч инкубации |В начале | | |окончании |следующего |5 — 10 |среда |10 |пересев в 1% ПВ с |следующего | | |рабочего |дня |мл | |мл среды с |ТК, |рабочего | | |дня | | | |материалом |высев на щелочной |дня | | |лаборатории | | | |в |агар и (или) ЭС | | | | | | | |50 мл 1% ПВ | | | |———|————|————|———|————-|————-|———————|————| |4 |Выходные |До 10.00 |1% ПВ с |Транспортная |Посев 5 — |Через 6 ч инкубации |В начале | | |дни |рабочего |ТК 50 мл |среда |10 |пересев в 1% ПВ с |следующего | | |лаборатории |дня | | |мл среды с |ТК, |рабочего | | | | | | |материалом |высев на щелочной |дня | | | | | | |в 50 мл 1% |агар и (или) ЭС | | | | | | | |ПВ | | | ————————————————————————————————————- Обозначения: ТК — теллурит калия; ПВ — пептонная вода; ЭС — элективная среда для выделения холерного вибриона Пробы до отправки в лабораторию сохраняют при комнатной температуре (24,0 +/- 1,0) ёC в биксах, ящике, шкафу и т.д. в специально выделенной комнате, закрывающейся на замок. Продолжительность сохранения проб в указанных условиях — до 24 ч. В случаях, когда температура в помещении превышает 25 ёC, материал следует брать в 1-процентную пептонную воду с теллуритом калия. В лаборатории в пробы во флаконах доливают соответствующую среду накопления в количестве до 50 мл, а из пробирок все 5 — 10 мл транспортной среды с материалом переносят пипеткой в 50 мл среды накопления. На период выходного дня лаборатории в порядке исключения допускается следующий вариант: забор материала в 50 мл 1-процентной пептонной воды с теллуритом калия (транспортная среда); допускаемое время сохранения проб до начала исследования при температуре (20,0 +/- 1,0) ёC — 60 ч, (27,0 +/- 3,0) ёC — 48 ч. В лаборатории 5 — 10 мл поверхностного слоя среды с материалом переносят в 50 мл 1-процентной пептонной воды без теллурита калия (1 среда накопления) и делают высев на чашку щелочного агара с дальнейшим исследованием по изложенной схеме. Пептонную воду повышенной щелочности в качестве накопительной среды рекомендуется использовать только на первом этапе исследования с удлинением срока инкубации ее до 18 — 24 ч. Основной раствор пептона и 1-процентную пептонную воду с рН 9,5 +/- 0,5 можно готовить впрок по общепринятой методике с подщелачиванием до необходимого уровня и последующей стерилизацией при температуре 120 ёC — 20 мин. Для подщелачивания пептонной воды используют 10 — 20% NaOH.

Stylab / Каталог / Микробиология / Вибрионы

СТАЙЛАБ предлагает тест-системы для выделения и очистки ДНК вибрионов, проведения ПЦР в реальном времени, а также тест-системы для микробиологического анализа вибрионов.

Выделение и очистка ДНК F1021 SureFast ® PREP Bacteria I

ПЦР в реальном времени (качественный анализ) F5161 SureFast® Vibrio 4plex Микробиологический метод анализа, тест-подложки HS8821 / HS8822 Compact Dry VP

Вибрионы – это палочковидные грамотрицательные бактерии, способные двигаться при помощи одного или нескольких жгутиков. Чаще всего они являются факультативными анаэробами, что означает, что эти бактерии способны существовать и размножаться как в присутствии кислорода, так и в бескислородной среде. Некоторые из вибрионов вызывают заболевания людей, другие опасны для животных, рыб, ракообразных или моллюсков.

Пожалуй, наиболее известным из вибрионов является Vibrio cholera – возбудитель холеры. Основным проявлением этой болезни является диарея, вызываемая токсином холерного вибриона. В тяжелых случаях она приводит к серьезному обезвоживанию организма, и, как следствие, к смерти. Легкие формы холеры сложно отличить от пищевых токсикоинфекций, отравлений и других подобных состояний без ряда анализов. Зачастую холерные вибрионы присутствуют в организме, ничем себя не проявляя. При этом бессимптомные носители способны распространять их. В редких случаях человек может стать хроническим носителем этих микроорганизмов.

Холерный вибрион неустойчив к высыханию и воздействию кислот, в том числе, соляной кислоты, содержащейся в желудке. Возможно, это одна из причин, по которым заражение холерой при употреблении воды или пищи, содержащей патогенные вибрионы, происходит не всегда. Для процветания холерному вибриону необходима пресная или солоноватая вода (хотя он, в отличие от многих других микроорганизмов, выдерживает засоление до 25%), богатая органикой, особенно остатками белков. Такие условия присутствуют в дельтах рек Индии, и считается, что холерный вибрион длительное время обитал только на ее территории. Распространиться далеко за ее пределы он не мог: этому препятствовали засушливые области и горы. Чтобы пересечь их, вибрионам требовался носитель – человек или моллюск, в которых этот организм способен накапливаться, или же достаточно богатая органикой вода в емкости, изолированной от окружающей среды. Вероятно, такое происходило, и неоднократно: бессимптомное течение холеры и хроническое носительство оставляют человеку-носителю возможность перейти горы, пустыни или степи, не умерев от обезвоживания. Однако судя по тому, что до 1817 года эпидемии холеры не были зафиксированы вне Индии, вибрионов, успешно преодолевших все препятствия и попавших на подходящие территории, было слишком мало. Возможно, впрочем, что заболевание, вызываемое ими, просто не распознавали как холеру, принимая ее, например, за смертельное пищевое отравление или дизентерию.

Что именно привело к первой пандемии холеры и как именно вибрион попал из Индии в Китай, Японию, Персию и на юг Российской Империи, в Астрахань, неизвестно до сих пор. Эпидемия началась в Индии, но они происходили и ранее. Помочь холерному вибриону распространиться могло усиление торговых и особенно военных транспортных потоков, а также нерегулируемый сброс балластных вод кораблями в портах. В Астрахань микроорганизм попал, вероятно, из Персии, с судами, ходившими по Каспийскому морю. Пандемия продолжалась до 1824 года, после чего по неизвестным причинам прекратилась. За ней последовали еще шесть пандемий. Возбудитель холеры впервые был выявлен в 1854 году Филлипо Пачини. Однако его работы были малоизвестны, и о холерном вибрионе заговорили лишь после того, как в 1883 году его обнаружил Роберт Кох. Считается, что в этом открытии ему способствовала смерть Луи Тюиллье, одного из учеников Пастера, от холеры, которую он исследовал в Египте вместе с коллегами.

В настоящее время в составе Всемирной Организации Здравоохранения существует Глобальная целевая группа ВОЗ по борьбе с холерой, оказывающая поддержку по борьбе и профилактике холеры на уровне стран.

Парагемолитический вибрион (Vibrio parahaemolyticus) не так широко известен, как возбудитель холеры. Этот патогенный микроорганизм распространен в азиатских странах, в том числе, в Японии, где в 1950 году и был выявлен впервые – как возбудитель кишечной инфекции с летальностью в 7,5%. Он также обнаружен в Черном и Каспийском морях, в Африке и Латинской Америке. Парагемолитический вибрион плохо переносит сильное нагревание, но сохраняется в замороженных продуктах и устойчив к воздействию соли: в слабосоленых и сушеных продуктах он способен даже размножаться. На средах без соли парагемолитический вибрион не растет.

Чаще всего им заражаются при употреблении в пищу блюд из моллюсков, крабов, креветок и рыбы, которые были недостаточно качественно приготовлены или хранились в ненадлежащих условиях. В некоторых случаях заражение происходит при употреблении пищи на которую попала морская вода. Энтеротоксин парагемолитического вибриона вызывает энтерит, сопровождающийся диареей. В некоторых случаях парагемолитический вибрион вызывает раневые инфекции.

Vibrio vulnificus нередко накапливается в двустворчатых моллюсках. При попадании этого вибриона в раны возникает гнойная инфекция, тяжелые формы которой схожи с газовой гангреной. Если этот вибрион с морской водой проникает в легкие, он может стать причиной пневмонии. Описаны случаи эндометритов, вызванных V. vulnificus. Употребление в пищу моллюсков, зараженных этим микроорганизмом также приводит к заболеваниям, которые проявляются в том числе в форме поражений кожи. Кроме того, этот вибрион вызывает у людей острые уретриты, кардиоваскулиты и воспаления подкожной жировой ткани. Зафиксированы смертельные случаи таких заболеваний.

В Российской Федерации содержание парагемолитического вибриона ограничено в продуктах из морской рыбы, ракообразных и моллюсков. Согласно Техническому Регламенту Таможенного Союза ТР ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции», содержание V. parahaemolyticus в охлажденной морской рыбе не должно превышать 100 КОЕ/г.

Методы определения вибрионов включают микробиологические и биохимические методы анализа. К микробиологическим методам относится культивирование бактерий на селективных средах. К биохимическим – анализ того, какие именно вещества способны ферментировать обнаруженные микроорганизмы. Сочетание этих методов позволяет с высокой точностью детектировать бактерии. Наиболее точным методом определения вибрионов является анализ ДНК с помощью метода ПЦР.

Литература

←ВернутьсяИнфекционист Синицына Ольга Валентиновна Стаж 32 года Высшая квалификационная категория врача-инфекциониста

Холера – острая кишечная инфекция, поражающая ЖКТ и протекающая с развитием диареи (иногда – острой и крайне опасной). Возбудителем, причиной холеры, является так называемый холерный вибрион – это бактерия Vibrio cholerae.

Как происходит заражение холерой

Возбудитель обычно проникает в организм с едой или водой, которые были заражены – это основные пути передачи холеры. Чаще всего распространение этой болезни связано с недостаточным уровнем санитарно-эпидемиологических норм, а также с тем, что люди сами не соблюдают элементарные правила гигиены и употребляют в пищу непроверенные продукты, пьют грязную воду. В основном заражения характерны для стран, в которых очаги болезни вспыхивают постоянно. К ним относятся:

• Йемен;
• Ирак;
• Иран;
• Индия;
• Нигерия;
• Уганда;
• Мексика;
• Танзания;
• Бразилия.

Причем обычно речь идет о неблагополучных, плохо благоустроенных районах, в которых у населения недостаточные представления о гигиене. Регистрируется холера и на территории стран СНГ, но довольно редко и не в таких объемах.

Симптоматика заболевания

Симптомы холеры разнообразны и включают следующие моменты:

• повышенная температура (37-38), которая с развитием болезни может наоборот понизиться (до 34-35 градусов);
• озноб4
• обильная и водянистая диарея. Цвет стула разный: он может быть желто-зеленым, а может быть коричневым;
• рвота. Часто она возникает без позывов, внезапно;
• урчание в животе, метеоризм, легкие боли;
• ощущение, что живот переполнен большим количеством жидкости;
• ощущение сухости. Губы сохнут, постоянно хочется пить, наблюдается серьезная слабость. В ряде случаев губы могут синеть;
• понижение артериального давления, что связано с обезвоженностью организма;
• головные боли – причем сама боль локализуется в лобной части.

Важно понимать, что этими симптомами холеры проблема не ограничивается. Если пациенту не оказать своевременную помощь, он рискует получить осложнения – и с ними картина обстоит куда хуже.

Осложнения при холере

Мало знать симптомы и причины холеры – необходимо понимать, чем грозит это непростое заболевание. Вот только несколько моментов:

• острая почечная недостаточность, расстройство различных обменных процессов в организме с непредсказуемым результатом;
• сильное падение кровяного давления;
• инфаркт миокарда;
• нарушение мозгового кровообращения со множеством серьезных последствий.

Одно из перечисленных осложнений может привести к смерти зараженного. Своевременное лечение холеры позволяет этого избежать.

Диагностика заболевания

При диагностике холеры важным моментом является выяснение тех мест, где человек мог эту болезнь подхватить – чтобы провести определенные санитарно-эпидемиологические мероприятия и не допустить вспышки эпидемии.

Далее врач опрашивает пациента, чтобы уточнить особенности диареи, различных болей. Дополнительно проводятся анализы – исследование каловых масс на наличие возбудителя, а также изучение крови на наличие определенных антител.

Диагностика холеры с учетом совокупности методов дает точный результат и позволяет начать эффективное лечение.

Как лечат пациентов с холерой

Для лечения холеры используют:

• антибиотики;
• пробиотики для восстановления микрофлоры кишечника;
• водно-солевые растворы и глюкозу (внутривенное, при сильном обезвоживании и истощении).

Будьте внимательны! Лечение холеры в домашних условиях невозможно и крайне опасно. Чем сильнее затянуто состояние пациента, тем выше риски осложнений, вплоть до летального исхода.

При наличии симптомов необходимо обратиться к врачу-инфекционисту либо вызвать скорую помощь на дом.

После лечения пациенты, перенесшие холеру, еще в течение года дополнительно наблюдаются у врачей.

Профилактические меры

Профилактика холеры заключается в следующем:

• делать вакцину от холеры, рекомендованную ВОЗ. В разных странах иммунизация населения проводится централизованно и строго контролируется. Однако она способствует выработке общего иммунитета – для каждого конкретного человека действие вакцины со временем ослабевает, поэтому требуются и другие меры профилактики;
• избегать тех стран и регионов, в которых вспышки болезни наблюдаются регулярно;
• употреблять в пищу только ту еду, которая прошла термическую обработку или была хорошо вымыта с мыльным раствором;
• употреблять исключительно чистую воду из тех источников, которые для этого предназначены;
• регулярно мыть руки;
• хранить продукты в подходящих для этого условиях – вдали от мест, где на них садятся насекомые.

Также рекомендуется следить за обстановкой в регионе, и если поблизости выявлены вспышки холеры, требуется усиливать контроль за гигиеной, качеством продуктов и воды.

Вопросы-ответы

Холера – это смертельно?

Своевременное лечение холеры позволяет пациенту полностью выздороветь. Но смертельные случаи бывают, как правило, они запущены самими пациентами.

Холерой болеют только в бедных странах?

Нет, это заболевание может встретиться в любой стране – различие в количестве, интенсивности и регулярности вспышек. Соблюдать гигиену следует всегда.

Насколько холера опасна для детей?

У детей холера, как правило, протекает в более сложной форме и предполагает выраженное обезвоживание. Они особенно сильно нуждаются в быстрой помощи.

Бывали ли крупные вспышки холеры?

Да, в истории насчитывается целых семь пандемий холеры. Первая приходится на 1816-1824 года, а седьмая – на 1961-1975 года.

Современная опасность холеры: насколько она высока?

На данный момент опасность намного ниже, чем полвека назад – вспышки заболевания редкие, относительно небольшие. Однако предосторожности, связанные с собственным здоровьем, все равно не помешают.

Клинические рекомендации при холере предполагают, что меньше всего подвержены рискам люди, которые внимательно относятся к гигиене и не посещают потенциально опасные места. В случае появления болезни выигрывает тот, кто при первых симптомах обращается к инфекционистам или вызывает скорую помощь. Также описанные симптомы могут иметь отношение к другим инфекционным заболеваниям – их своевременное обнаружение тоже может спасти пациенту жизнь.

Документ показан в сокращенном демонстрационном режиме! Стоимость документа 150 тенге

Получить полный доступ к документу

Стань пользователем

Доступ к документу можно получить: Для зарегистрированных пользователей:

Для покупки документа sms доступом необходимо ознакомиться с условиями обслуживания
Я принимаю Условия обслуживания
Продолжить

• Поставить закладку
• Посмотреть закладки

Вибрионы (семейство Vibrionaceae)

Семейство Vibrionaceae включает 3 рода: Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas. Они являются обитателями водных поверхностей земного шара как морских, так и пресноводных, являясь во многих случаях симбионтами водной фауны. Морфологически представляют грамотрицательные изогнутые палочки, не образующие спор, подвижные за счет полярно расположенных жгутиков. Большинство из них оксидазоположительны. Обладают как ферментативным, так и окислительным типом метаболизма. Неприхотливы к питательным средам. В связи с тем, что большинство из них являются естественными обитателями морей, для их культивирования следует в питательные среды добавлять от 0,5-2% NaCl.

1. Возбудитель холеры (Vibrio cholerae)

Холера — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением тонкой кишки, нарушением водно-солевого обмена и интоксикацией. Это особо опасная карантинная инфекция. Возбудителем холеры являются представители вида Vibrio cholerae серогрупп О1 и О139.

Возбудители холеры относятся к роду Vibrio, семейства Vibrionaceae. Внутри вида Vibrio cholerae различают два основных биовара: биовар cholerae classic, открытый Р. Кохом в 1883 г., и биовар El- 7or, выделенный в 1906 г. в Египте Ф. и Е. Готшлихами на карантинной станции Эль-Тор.

Морфология. Холерный вибрион — грамотрицательная палочка в форме запятой, длиной 2-4 мкм, толщиной 0,5 мкм. Не образует спор и капсулы, монотрих, чрезвычайно подвижен.

Культуральные свойства. Является факультативным анаэробом, но предпочитает аэробные условия роста, поэтому на поверхности жидкой питательной среды образует пленку. Холерный вибрион неприхотлив в росте и может расти на простых средах. Оптимальная температура роста 37 0С и рН 8,5-9,0. Для оптимального роста требует присутствия в среде 0,5% натрия хлорида. Средой накопления является 1% щелочная пептонная вода, на которой он образует пленку в течение 6-8 ч. Элективной средой является TCBS-среда (тиосульфат-цитратный сахарозо-желчесодержащий агар), на котором образует колонии желтого цвета. Щелочной агар и триптонсоевый агар (ТСА) используют для субкультивирования.

Биохимические свойства. Биохимически активен. Оксидазоположителен. Обладает протеолитическими и сахаролитическими свойствами: продуцирует индол, лизиндекарбоксилазу, разжижает в воронковидной форме желатин, сероводород не продуцирует. Ферментирует глюкозу, сахарозу, маннозу, крахмал, лактозу (медленно). Не сбраживает рамнозу, арабинозу, дульцит, инозит, инулин. Обладает нитратредуктазной активностью.